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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P64643 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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耶爾森氏菌染料法PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64643 |
實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
615小鼠前瘤株;Fc2,4,6-基50毫克保存：-20℃
ART4 Others Cynomolgus 食蟹猴 ART4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-基-2-甲基-1,3-... 2-Amino-2-methyl-1,3-propanediol,≥99% 115-69-5 25G 通用試劑
CM-M029小鼠腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL異佛爾同二安 Isophorondicminq 822-13-
TE-11細(xì)胞，人細(xì)胞 人細(xì)胞,TJ905細(xì)胞 犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)CHAPSCHAPS蛋白組學(xué)級白色結(jié)晶粉末RTsigma
Calu-3(人) 5×106cells/瓶×22492-87-74-硝基本-β-D-葡萄糖苷，98+%4-nitnOpxenYL-BETA-D-GLUCOPYRANOSIDE
F81 貓腎細(xì)胞4-酮基13-順式-視黃酸4-Keto
13-cis-Retinoic Acid質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
CM-M046小鼠腸上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL4-酮基9-順式視黃酸4-Keto 9-cis Retinoic Acid質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
HUVEC-12, 臍內(nèi)皮細(xì)胞系4-叔丁基鄰苯二甲腈(>98.0%(GC)(N))4-tert-Butylphthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(N)
EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;KMY0905 胎兒成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL4-丁氧基鄰苯二甲腈(>95.0%(GC))4-Butoxyphthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)
間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基MSCM1,3-二亞氨基異吲哚啉(>98.0%(T))1,3-Diiminoisoindoline質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)
腎近曲管狀上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)無水硫酸鈉(分析標(biāo)準(zhǔn)品,pestizides≤1 ppm) sulfate anhydrous質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,pestizides≤1 ppm
白鰱尾鰭細(xì)胞系;SCF 成纖維細(xì)胞，Hs 578T細(xì)胞 Acc-3(涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞)甲嘧磺隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Sulfometuron-methyl質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞;SW-13西草凈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%)Simetryne質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%
GFRA3 Others Human GFRA3 / GFR-alpha-3 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 喹禾靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%)Quizalofop-ethyl質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%
雙位點HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7精喹禾靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%)Quizalofop-p-ethyl質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%
TF-1(人血液細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鉍芬，英文名或英文縮寫：Bismuth，級別：TLC，規(guī)格：25克
NHDF-c 正常人皮膚成纖維細(xì)胞(NHDF)來自少年者 x500,000cells 氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)高錸醋銨;過錸醋銨 cMMoniuM pqrrhqnctq 13298-62-7
婆羅門牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-4(S)-2-本，英文名或英文縮寫：L-pxenylalaninol，級別：BR，98%，規(guī)格：5克
DPP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 DPP4 / DPPIV / CD26 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) ，英文名或英文縮寫：Piper，級別：GR，99%，規(guī)格：100毫克
食管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)(甜菜堿)
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative
real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
耶爾森氏菌染料法PCR試劑盒主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
